药品卫生检验方法
卫生部
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第一章 药品卫生检验通则
一、供试品取样及注意事项
1．供试品取样应有一定数量，以使检验结果具有代表性。因此，正常的供试品，一般每批应随机抽取两瓶或两盒以上的包装单位。检验时，每次最少应分取两瓶（盒）以上的样品共10克或10毫升，中药蜜丸至少应分取4丸以上共10克；贵重或微量包装的供试品，取样量可酌减
。
2．凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。
肉眼能看出发霉生虫变质、活螨的样品，应判为不合格，无需再作抽样检验。
3．检查活螨的样品抽样量，见活螨的检验法。
4．供试品在检验前，应严格保持包装的原有状态，不得启开，防止再污染。并放在阴凉干燥处，防止微生物再繁殖，以免影响检验结果。凡已将原包装启开，则无代表性，应另行取样。
5．供试品在检验过程中，从开封至全部检验操作结束，须防止微生物再污染和扩散。凡直接与样品接触的用具，均应事先灭菌并保持无菌；全部操作须在无菌室内进行，或在相应的条件下，按无菌操作规定进行。
6．供试品稀释后，须在1—2小时内操作完毕，防止微生物繁殖或死亡。
7．供试品稀释成供试液后，应在均匀状态下取样。凡因抑菌或不溶于水的剂型，其供试品应作特殊处理后进行检验。
8．从供试品检出大肠杆菌或其它致病菌的报告发出起，该菌种保存一个月备查。如有疑问，可送药检部门或上一级药检单位复核。
二、供试品制备
1．凡固体样品，应称取10克，加在100毫升稀释剂（生理盐水或磷酸盐缓冲液）中，经充分研磨或振摇制成供试液。液体样品，则可量取10毫升加在90毫升稀释剂中，混匀后成供试液。
2．凡含有防腐剂或抑菌成份且影响检验的供试品，可经离心沉淀集菌法及其他适宜的方法处理后，检验大肠杆菌和其他致病菌。集菌处理法如下：
取供试液10毫升，以无菌手续放在灭菌的尖底刻度离心管中，经每分钟3500转以上离心沉淀30分钟，用灭菌毛细吸管吸取上清液弃掉，并留下管底的2毫升残余液，将其全部洗净加在培养基中，进行增菌检验。含有不溶性药渣的样品稀释液，可均匀吸取10毫升放在离心管中
，先经每分钟500转左右离心沉淀5分钟，取其上清液放在另一灭菌尖底刻度离心管中，再经每分钟约3500转以上离心沉淀30分钟，轻轻吸取上清液弃掉，取其管底的2毫升残余液全部洗净加在培养基中，增菌检验即得。
3．非水溶性的软膏、乳膏、油膏剂等，可称取样品5克，放在乳钵或烧杯中，加8毫升灭菌的吐温—80充分研磨匀后，加入经140°干热灭菌半小时的西黄蓍胶2．5克研磨匀。再加少量45°的稀释剂充分研磨，使呈均匀乳剂。随后边加入稀释剂边研磨，使成100毫升乳剂
，移至三角瓶中，即为1∶20供试液。
或称取供试品2．5克，分别量取液体石蜡10毫升，吐温—80．10毫升，稀释剂30毫升。先将供试品置乳钵中，边研磨边滴加液体石蜡；然后再边研磨边滴加吐温—80，研磨均匀后；再边加入稀释剂边研磨，开始每次约1毫升，待起团块时，加入稀释剂3毫升，稍停一分钟
，再轻轻研磨至乳化，将稀释剂加完为止，即得1∶20供试液。
4．滤膜法：取规定量的供试品，按1毫升加入灭菌生理盐水50毫升左右，摇匀，用灭菌吸管或注射器注入薄膜过滤器内，减压抽干后，用灭菌生理盐水或其他适宜的溶剂冲洗薄膜3次，每次50毫升。取出薄膜，剪成几条，加至10毫升灭菌稀释剂中，充分摇动，使成供试液。可
供细菌、酵母菌和霉菌计数用。或将剪成几条的上述薄膜加至有关的增菌培养基中培养，可供检查绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌用。
三、阳性菌株对照试验
1．为便于研究观察成药制剂中，某些含有防腐剂和抑菌成份的干扰作用，以及测试常规检验方法和培养基、试剂等的灵敏度时，可将定量的已知阳性对照菌加在供试品稀释液中，按检验供试品的操作方法进行阳性菌的对照试验。阳性对照菌应生长。
2．常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、沙门氏菌50094、绿脓杆菌10104、金黄色葡萄球菌26003和破伤风杆菌64067等。
3．对照试验加入的已知活菌量，每批供试品应控制在50—100个范围之内，需氧菌常用的计数方法，如金黄色葡萄球菌可用37℃培养18—20小时
－6
新鲜肉汤培养物，十倍递增稀释至10 ，取其0．1
－7
毫升按琼脂平板表面涂抹法或取10 稀释液1毫升按浇碟法进行活菌数测定。按每毫升菌液内所含的活菌量，取适量加在供试品里，对照检验即得。破伤风杆菌的阳性对照以作毒力试验为主（具体操作见破伤风杆菌检验项下。）
4．作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染供试品和环境。为此，加入阳性菌的操作可在另外无菌室或其他适宜的地方进行。
第二章 药品卫生检验法
一、细菌总数测定法
细菌总数的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染的活菌数量。测定结果便于判明供试品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的药品原料、工具设备和工艺流程、操作者的卫生状况，是对供试品进行卫生学总评价的综合依据。
1．供试品的测定：
固体供试品，以无菌操作称取若干克，按下列方法之一进行稀释：
（1）将已称取供试品置入灭菌乳钵中加入适量稀释剂，充分研磨，然后移至于灭菌三角瓶中，共加入稀释剂100毫升，使成1∶10均匀供试液。
（2）将已称取的供试品连同100毫升的稀释剂加入灭菌三角瓶或其他相应容器内，进行振荡，使成1∶10的均匀供试液。
液体供试品，可量取10毫升加入90毫升稀释剂，混匀即得。
用1毫升灭菌吸管，吸取1∶10供试液1毫升，沿管壁注入装有9毫升灭菌的稀释剂试管内，混匀即为1∶100稀释液。
另取1毫升灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释。如此每递增稀释一次，应换用1支1
－3
毫升灭菌吸管并充分混匀，稀释至10 或适当倍数备检。
另用1毫升灭菌吸管1支，按高倍稀释至低倍稀释的顺序分别吸取各稀释度的液体1毫升，注入直径9厘米的平皿内，或在作上述10倍递增稀释时，应稀释妥一稀释度，即可取1毫升稀释液注入平皿内。一般可根据对供试品污染情况的估计，从供试液起选择2—3个适宜稀释度进行
测定，每个稀释度各用2—3个平皿。
稀释液注入平皿后，应及时将熔化并冷至45—50℃的肉汤琼脂培养基倾注平皿内，各约15毫升，随即转动平皿使充分混合均匀。待琼脂凝固后，翻转平板，置37℃培养箱内培养至24小时和48小时，并分别计算平板内生长的的菌落。一般以48小时的菌落数为准。
为减少片状菌落的干扰，也可采用0．001％ＴＴＣ琼脂，在无菌室开盖倒置或换灭菌的干燥陶瓦盖等方法使平板表面干燥后，再进行培养。
2．菌落计数方法：
先用肉眼观察，点数菌落数（霉菌不包括在内），然后持5—10倍放大镜检查有无遗漏。各平板菌落计数后，求出同一稀释度各平板生长的平均菌落数。如平板中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平板不宜计数。
3、细菌菌数报告：
一般的报告方法是选取同一稀释度平均菌落数在30—300之间的平板，作为菌落总数测定的范围。如每个稀释度使用两个平板，应采用两个平板的菌落平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，或两平板菌落数相差一倍以上，此稀释度不宜采用。如每个稀释度使用三个平板，
应采用三个平板菌落数的平均数，其中有两个平板菌落数较接近，另一个平板相差在一倍以上，或有片状菌落生长时，则应采用前者平均数为该稀释度的菌落数，按下列规则乘其稀释倍数报告之。
稀释度的选择：
（1）若只有一个稀释度，平均菌落数在30—300个之间时，乘以稀释倍数报告之（见表1例1）。
（2）若两个稀释度，其平均菌落数均在30—300个之间，则应求出两者总菌数之比，凡比值小于或等于2应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的数字。（见表1例2、3）。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均多于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表1例4）。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释倍数最低的平均菌落数，乘以稀释倍数报告之（见表1例5）。
（5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，其中一个稀释度大于300，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1例6）。
（6）若所有稀释度均无菌生长，报告数为＜10个／克或毫升。
菌数的报告，菌数在100以内时，按实有数报告之，大于100时，采用左端前二位数字，在前两位数字之后的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1）。
如供试品经检验，细菌数不合格，需复验时，应重新取样，依法复试两次，细菌数仍有一次不合格时，则该供试品细菌数应判为不合格。
表1 细菌计数结果及报告方法
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
＼ 平均菌｜ 供试品稀释倍数 ｜两 数｜ 菌落 ｜
＼ 落数 ｜－－－－－－－－－－－－－－｜稀 ｜ 总数 ｜ 细菌总数报告方式
＼ ｜ －1｜ －2｜ －3｜释 之｜ （个／ ｜ （个／克或毫升）
例 ＼ ｜10 ｜10 ｜10 ｜度 ｜ 克或 ｜
次 ＼｜ ｜ ｜ ｜菌 比｜ 亳升） ｜
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
1 ｜1365｜ 164｜ 20 ｜ — ｜ 16400｜ 16000｜或1．6×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
2 ｜2760｜ 295｜ 46 ｜1．6｜ 37750｜ 38000｜或3．8×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
3 ｜2890｜ 271｜ 60 ｜2．2｜ 27100｜ 27000｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 5
4 ｜不可计 ｜4650｜ 513｜ — ｜513000｜510000｜或5．1×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 2
5 ｜ 27 ｜ 11 ｜ 5 ｜ — ｜ 270 ｜ 270 ｜或2．7×10
－－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－－｜－－－｜－－－－－－｜－－－－－－｜－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ 4
6 ｜不可计 ｜ 305｜ 12 ｜ — ｜ 30500｜ 31000｜或3．1×10
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
二、霉菌总数测定法
霉菌总数（包括酵母菌）的测定，是考察供试品每克或每毫升内所污染活的酵母菌、霉菌数量，借以判明供试品的酵母菌、霉菌污染程度及其一般卫生状况。
1．供试品的测定：
供试液与稀释按细菌总数测定项下规定的方法进行。取供试液、1∶100和1∶1000的稀释液各1毫升分别注入平皿内，每个稀释度各用2—3个平皿，加入稀释液后将熔化并冷至45—50°的虎红琼脂培养基约15毫升倾入平皿内，充分摇匀。凝固后，翻转平板置25—2
8°培养72小时，计算平板内生长的霉菌菌落数。若有根霉或毛霉蔓延生长，为避免影响其它霉菌的计数时，应及时将此平板取出计数。
2．酵母菌霉菌菌数报告：
酵母菌、霉菌计数，应选取带有菌丝体的菌落和酵母菌菌落进行点数。先点清每个平板上生长的菌落数，再求出每一稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取平板上菌落数既清楚可数，平均又在5—50个范围以内的菌落数，乘以稀释倍数后，做为供试品的霉菌总数报告之。若有两
个稀释度的菌落数皆在5—50个以内或三个稀释度皆不在此范围之内时，应参照细菌总数测定的规则报告之。
一般眼科制剂的细菌、霉菌总数测定按上述方法进行并报告之。如抗生素或有抑菌作用的制剂，采用适宜的方法处理后，按常规方法进行。
如供试品经检验，霉菌总数不合格，需复检时，应重新取样，依法复试两次。霉菌数仍有一次不合格时，供试品应判为酵母菌、霉菌数不合格。
三、大肠杆菌检验法
大肠杆菌来源于人和温血动物的粪便。凡由供试品中检出大肠杆菌时，表明该药品已被粪便污染，患者服用后，有被粪便中可能存在的其它肠道致病菌和寄生虫卵等病源体感染的危险。因此，大肠杆菌被列为重要的卫生指标菌，是非规定灭菌口服药品的常规必检项目之一。
大肠杆菌检验程序。
表2 肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜爱 ｜ ｜亚 ｜枸 ｜克 ｜ 肠 杆 菌 属 ｜ 沙 雷 氏 菌 属 ｜
菌属 ｜艾 ｜志 ｜德 ｜沙 ｜利 ｜橼 ｜雷 ｜－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－｜
｜希 ｜贺 ｜华 ｜门 ｜桑 ｜酸 ｜伯 ｜ ｜ ｜ 哈夫尼亚 ｜ ｜ ｜ 液化 ｜
－－－－－－｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜氏 ｜那 ｜杆 ｜氏 ｜阴沟｜产气｜－－－－－－｜粘 质｜红色｜－－－－－｜
生化特性 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜菌 ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜37℃｜22- ｜
｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜属 ｜ ｜ ｜ ｜25℃ ｜ ｜ ｜ ｜25℃｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基质 ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基红 ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-/+ ｜-/+ ｜+/- ｜-/+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反应 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+/- ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸橼 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜(+) ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
酸盐 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
硫化氢（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
铁） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ w ｜-, ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+)w ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氰化钾 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
动力 ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明胶(22℃)｜- ｜- ｜- ｜- ｜(+) ｜- ｜- ｜(+) ｜-/ ｜ ｜- ｜+/ ｜+ ｜ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/- ｜(+) ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
赖氨酸脱羧 ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+/ ｜+/- ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸双水 ｜d ｜-/ ｜- ｜(+) ｜+/ ｜d ｜- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
解酶 ｜ ｜(+) ｜ ｜/+ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鸟氨酸脱羧 ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脱 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸钠 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜+/- ｜+/- ｜+/- ｜d ｜- ｜+/- ｜- ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖产气 ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+°/- ｜-/+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜d ｜(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜-/ ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜(+) ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜d ｜-/(+) ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+ ｜+/- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
卫矛醇 ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜d ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水杨甙 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
侧金盏花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜-/+ ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜d ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜d ｜d ｜+ ｜+ ｜
－－－－－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－｜－－｜
山梨醇 ｜+ ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜+ ｜d ｜- ｜+/ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜d ｜+ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ 果胶杆菌属｜ 形 杆 菌 属 ｜普罗菲登斯菌属
菌属 ｜－－－－－－｜－－－－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－
－－－－－－｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
生化特性 ｜37℃｜22- ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜25℃ ｜普 通｜奇异｜摩根氏｜雷极氏｜产碱｜司徒氏
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
靛基质 ｜-/+ ｜-/+ ｜+ ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甲基红 ｜-/+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
Ｖ－Ｐ反应 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
西蒙氏枸橼 ｜d ｜+/(+) ｜d ｜+/ ｜- ｜+ ｜+ ｜+
酸盐 ｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
硫化氢（三糖｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
铁） ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ w ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
尿素酶 ｜d ｜d ｜+ ｜+/ ｜+ ｜+ ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜(+) ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
氯化钾 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
动力 ｜+/- ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/- ｜+ ｜+ ｜+/-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
明胶(22℃)｜ ｜+/(+) ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
赖氨酸脱羧 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
精氨酸双水 ｜- ｜-/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
解酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鸟氨酸脱羧 ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜- ｜- ｜-
酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
苯丙氨酸脱 ｜- ｜- ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+ ｜+
氨酶 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
丙二酸钠 ｜-/+ ｜-/+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
葡萄糖产气 ｜-/+ ｜d ｜+°/- ｜+ ｜d ｜-/+ ｜d ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
乳糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
蔗糖 ｜+/- ｜+ ｜+ ｜d ｜- ｜d ｜d ｜(+)
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜/+
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
甘露醇 ｜+/- ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜d
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
卫矛醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
水杨甙 ｜d ｜+ ｜d ｜d ｜- ｜d ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
侧金盏花醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜+ ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
肌醇 ｜d ｜- ｜- ｜- ｜- ｜+ ｜- ｜+
－－－－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－｜－－－｜－－｜－－－－
山梨醇 ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜d ｜- ｜d
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
阿拉伯糖 ｜d ｜+ ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
棉子糖 ｜d ｜+/(+) ｜- ｜- ｜- ｜- ｜- ｜-
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鼠李糖 ｜d ｜d ｜- ｜- ｜- ｜+/- ｜- ｜-
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
注：＋90％以上阳性；－90％以上阴性；（＋）迟缓阳性；ｄ有不同生化型；“微弱阳性；＋°微产气；＋／（＋）多数阳性，少
数迟缓阳性；（＋）／＋多数迟缓阳性，少数阳性；＋／－多数阳性，少数阴性；－／＋多数阴性，少数阳性；－／（＋）多数阴
性，少数迟缓阳性；（＋）／－多数迟缓阳性，少数阴性；＋°／－多数阳性微产气，少数阴性。
大肠杆菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓稀释
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－
｜ＭａｃＣ平板或ＥＭＢ｜
－－－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－
｜纯培养｜
－－－－－
37°↓18－24小时
－－－－－－－
｜染色、镜检｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ＩＭＶｉＣ试验｜ ｜乳糖发酵｜
－－－－－－－－－ －－－－－－
｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
（一）增菌培养：
取供试液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖增菌液内。置37°培养18—24小时，进行增菌。
（二）分离培养：
将上述增菌培养物，划线接种于麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）或伊红美兰（ＥＭＢ）琼脂平板上，置37°培养18—24小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色；在伊红美兰平板上的典型菌落呈紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑
湿润，常有金属光泽。由于药物影响，亦呈现紫色、粉紫、中心灰紫、无黑心、湿润等，常为大肠杆菌，均应注意挑选。
（三）纯培养：
至少挑选2—3个疑似大肠杆菌菌落，分别接种于肉汤琼脂斜面或三糖（双糖）铁琼脂斜面，置37°培养18—24小时。
（四）染色镜检：
将疑似大肠杆菌的纯培养物涂片、革兰氏染色。经染色镜检证明，为革兰氏阴性短杆菌者，应继续做生化试验。
（五）生化试验：
1．乳糖发酵试验
将上述纯培养物接种于乳糖发酵管，置37°培养24—48小时，凡大肠杆菌，可发酵乳糖产酸产气，或产酸不产气时，加用酸性复红指示剂的应显红色；加ＢＴＢ指示剂时显蓝色。产气者，倒管内有气泡。
2．ＩＭＶｉＣ试验：
①靛基质试验：将纯培养物接种于蛋白胨水，置37°培养24—48小时，沿管壁加柯凡克氏试剂0．3—0．5毫升，轻微摇动，静置片刻，观察液面。阳性反应，液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。
②甲基红试验：将纯培养的菌苔接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基内，置37℃培养24—48小时，加入甲基红试剂数滴，观察结果。阳性反应呈鲜红色或桔红色；阴性反应呈黄色。
③Ｖ—Ｐ试验：将纯培养物接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基内，置37°培养48小时，按培立脱法先加6％ａ－萘酚无水乙醇溶液1毫升，再加40％的氢氧化钾溶液0．4毫升，轻摇后观察结果。阳性反应，加入试剂后，应在15分钟内显红色、深红色。如不明显，可延长至
4小时。
④枸橼酸盐利用试验：将纯培养的菌苔接种于西蒙氏枸橼酸盐琼脂斜面，37°培养24小时，观察结果。阳性反应，斜面有菌苔生长，培养基由绿色变为蓝色。阴性反应斜面无菌苔生长，培养基仍为绿色。当见有微量或痕迹生长的可疑现象时，应将待检菌株分离，纯化后再行试验。
（六）供试品检验报告：
供试品增菌后，在麦康凯或伊红美兰琼脂平板上分离的疑似大肠杆菌，经证实为革兰氏阴性短杆菌，乳糖发酵试验阳性，ＩＭＶｉＣ试验呈＋＋－－或－＋－－反应者，应即报告供试品检出大肠杆菌。〔注〕
大肠杆菌及其他致病菌检查按一次检出结果为准，不再抽样复试。
〔注〕关于大肠杆菌的ＩＭＶｉＣ反应的说明
大肠杆菌ＩＭＶｉＣ试验的模式反应，在一般情况下应为“＋＋－－”或将“－＋－－”也包括在内，共代表了绝大多数大肠杆菌（占99％）的实际反应结果，因而受到了国际上的广泛承认，并将其列为大肠杆菌的常规鉴别ＩＭＶｉＣ反应公式。但个别大肠杆菌的ＩＭＶｉＣ反应，
也可能出现“＋－－－”和“＋＋－＋”等等异常现象。由于这种异常反应出现的频率极少，没有普遍性的代表意义，因而在分类鉴别和统计学上，可以忽略不计。
四、沙门氏菌检验法
沙门氏菌主要寄生在人体、哺乳动物和家禽的肠道内，可随同粪便的排泄污染水源，食品与药品。沙门氏菌的种类繁多，有些对人有致病力，如伤寒沙门菌和副伤寒沙门氏菌；有些对动物有致病力，如鸭沙门氏菌和雏沙门氏菌；尚有一些对人和动物皆有致病力，如肠炎沙门氏菌、鼠伤
寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌等。它们能引起人类伤寒症、急性胃肠炎和败血症等。
带有这些细菌的人与动物常可直接或间接地污染药品的生产环境、工具设备和原料辅料，以及半成品和成品等。特别是用动物脏器制成的药品，污染机率较高，影响患者用药安全，并有可能通过药品的流通而传播。故将沙门氏菌，应列为某些药品的必检项目。
沙门氏菌检验程序。
沙门氏菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓稀释
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌培养｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－
｜ＳＳ与ＥＭＢ平板｜
－－－－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－
｜三糖铁琼脂｜
－－－－－－－
37°↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜动｜ ｜镜｜ ｜凝｜ ｜ 一般生化反应 ｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜集｜ ｜－－－－－－－－－－－｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜试｜ ｜葡乳麦甘蔗靛硫尿赖脱氰｜
｜力｜ ｜检｜ ｜验｜ ｜萄 芽露 基化素氨羧化｜
｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜糖糖糖醇糖质氢酶酸酶钾｜
－－－ －－－ －－－ －－－－－－－－－－－－－
｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
（一）增菌培养：
取1∶10供试品稀释液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖增菌液内。置37°培养18—24小时，进行增菌。
（二）分离培养：
取上述增菌培养物，划线接种于ＳＳ琼脂和ＥＭＢ琼脂平板各一个（划线时，适当增加ＳＳ琼脂平板的涂抹量2—3环，可提高阳检率），置37°培养18—24小时。凡沙门氏菌，在ＳＳ和ＥＭＢ琼脂平板上，菌落一般无色透明或半透明，圆形，周边整齐，表面光滑湿润，在ＳＳ
琼脂平板上中心有时呈黑褐色。如有上述疑似菌落，应选取2—3个分别进行纯培养，按下列方法鉴别。
（三）初步鉴别：
将上述纯培养物分别穿刺并划线接种三糖铁（ＴＳＩ）琼脂，置37°培养18—24小时。凡在ＴＳＩ琼脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈碱性，不变色），下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色（有气泡或无气泡），有动力或无动力，以及产生或不产生黑褐色的硫化氢反应，并经
涂片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，都应继续做生化试验和血清学检查。
（四）生化试验：
取上述疑似菌落的纯培养物、分别接种至葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等发酵管培养基，并接种蛋白胨水和尿素培养基，经37°培养2—5天，观察结果。沙门氏菌一般生化反应和动力检查，绝大数应为、葡萄糖＋，乳糖－，麦芽糖＋，甘露醇＋，蔗糖－，靛基质－，硫化
氢＋，尿素酶－，动力＋。当一般生化试验符合时，应做赖氨酸脱羧酶及氰化钾试验。沙门氏菌赖氨酸脱羧酶试验＋，氰化钾－。系统生化试验，详见表2：肠杆菌科各菌属的生化特性鉴别表。
（五）动力试验：
取上述纯培养物穿刺接种半固体培养基，于37°培养24小时后，观察动力表现。无动力表现的培养物，应在室温（25°左右）保留2—3天后，再观察。
（六）血清学检查：
取上述疑似菌落的ＴＳＩ琼脂培养物少许，与沙门氏菌Ａ—Ｆ多价Ｏ血清作玻片凝集试验，并以生理盐水作对照试验。若凝集试验为阴性反应时，应将菌苔制成浓菌液在100℃水浴中保温30分钟后再进行Ａ—Ｆ多价Ｏ血清凝集试验。将反应结果，结合生化试验，判定之。
（七）供试品检验报告：
凡菌落形态与初步鉴定符合下列情况分别报告如下：
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
血 清 ｜ Ａ—Ｆ多 ｜生理｜ 一般｜
｜ 价Ｏ血清 ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－－－－－－－｜盐水｜ 生化｜ 报告
待 检 菌 ｜ ｜ 100°｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜ 菌苔 ｜ 03′ ｜对照｜ 反应｜
顺 序 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－－｜－－－－－｜－－｜－－－｜－－－－－－－－－－－
1 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜ 符合｜检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
2 ｜ ＋ ｜ ｜ － ｜不符合｜转有关部门进一步检定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
3 ｜ － ｜ ＋ ｜ － ｜ 符合｜检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
4 ｜ － ｜ ＋ ｜－ ｜不符合｜转有关部门进一步检定
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
5 ｜ － ｜ － ｜－ ｜不符合｜未检出沙门氏菌
｜ ｜ ｜ ｜ ｜
6 ｜ － ｜ － ｜－ ｜ 符合｜转有关部门进一步检定
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
五、绿脓杆菌检验法
假单胞菌属的绿脓杆菌对人类有致病力，同药品卫生有关。特别在大面积的烧伤、烫伤患者，眼科疾病和其他外伤方面，常因感染绿脓菌后病情加重，造成患者伤处化脓，并可引起菌血症等，眼角膜溃疡甚至失明，损害病人健康。因此一般眼科制剂和外伤用药，规定不得检出绿脓杆菌
。
绿脓杆菌检验程序（见次页）。
绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌的主要特性鉴别见表3。
（一）增菌培养：
取供试液10毫升，接种于备妥的100毫升胆盐乳糖培养液内，置37°培养18—24小时。
增菌后，如有绿脓杆菌生长，液体表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
一般滴眼剂如为抗生素或有抑菌作用的供试品，取样4毫升，用滤膜法处理后，将薄膜分成4片，分别接入100毫升的胆盐乳糖增菌液两瓶中，其中一瓶接阳性菌作对照。置37°培养18—24小时。
（二）分离培养：
取上述增菌培养物（应尽量从培养液的薄菌膜部位挑取），划线在十六烷三甲基溴化铵或明胶十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37°培养18—24小时。
凡绿脓杆菌在十六烷三甲基溴化铵平板上或在明胶十六烷三甲基溴化铵平板上其菌落扁平无定形周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性蓝绿色色素，在含有明胶平板上除上述形态外，菌落周围呈现明胶液化环。
挑取疑似绿脓杆菌菌落2—3个进行纯培养。
（三）染色镜检：
挑取疑似菌落纯培养物、涂片、革兰氏染色，经镜检为阴性杆菌者，应进行氧化酶试验。
（四）生化试验
1．氧化酶试验
取一小块白色洁净的滤纸片放在平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌疑似菌落的纯培养物，涂在滤纸片上，然后滴加一滴新鲜配制的1％二甲基对苯二胺盐酸盐试液于培养物上，在30秒钟之内，纸片上的待检培养物出现粉红色，并逐渐变为紫红色时，即为氧化酶试验阳性。若培养物
不变色，氧化酶试验阴性，供试品可按未检出绿脓杆菌报告。
2．绿脓菌素试验：
挑取纯培养物分别接种在专供测定绿脓菌素用的ＰＤＰ琼脂斜面培养基上，置37°培养24小时后，在试管内加氯仿3—5毫升，充分振摇，将琼脂斜面培养物中的待检色素提取在氯仿液里。待氯仿提取液呈蓝绿色时，用吸管将其移到另一试管中，并在该液中加1Ｎ的盐酸1毫升左
右，振摇后，静置片刻，如果在上层的盐酸液内出现粉红色时，即为阳性，表明被检菌的培养物中有绿脓菌素存在。如阴性，应继续将纯培养物接种在ＰＤＰ琼脂斜面上，37°培养2—3天后，检查有无绿脓杆菌素产生。
3．硝酸盐还原产气试验：
绿脓杆菌检验程序图解
－－－－－
｜供试品｜
－－－－－
↓
－－－－－
｜供试液｜
－－－－－
↓
－－－－－－－－
｜胆盐乳糖增菌｜
－－－－－－－－
37° ↓18—24小时
－－－－－－－－－－－－－－－
｜十六烷三甲基溴化铵平板或明｜
｜胶十六烷三甲基溴化铵平板 ｜
－－－－－－－－－－－－－－－
37° ↓18—24小时
－－－－－
｜纯培养｜
－－－－－
↓
－－－－－－－
｜染色、镜检｜
－－－－－－－
↓
－－－－－－－
｜氧化酶试验｜
－－－－－－－
｜
（－） －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ （＋）
↓ ↓
阴 性 －－－－－－－－
↓ ｜绿脓菌素试验｜
－－－－－ －－－－－－－－
｜报 告｜ （一） ↓ （＋）
－－－－－ －－－－－－－－－－－－
↓ ↓
－－－－－－－－－－－－－－－－－ －－－－－
↓ ↓ ↓ ｜报 告｜
－－－－－
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜明胶液化｜ ｜硝酸盐还原｜ ｜42°生长试验｜
｜ 试验 ｜ ｜产气试验 ｜ ｜ ｜
－－－－－－ －－－－－－－ －－－－－－－－－
｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
↓
－－－－－
｜报 告｜
－－－－－
表3 绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌的主要特性鉴别表
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
｜分离 ｜ 色素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
鉴 别 培 养 ｜－－－｜－－－－－－－－－－－｜ ｜氧｜氧｜ ｜精解｜硝 产｜ ｜42
｜ ｜ ｜ ｜ ｜鞭 ｜化｜ ｜ 乙 ｜氨 ｜酸 ｜液｜生
－－－－－－－－－－－｜十六烷｜ 绿 ｜ 萤 ｜ 其 ｜毛 ｜葡｜化｜ 酰 ｜酸 ｜盐 ｜化｜长
｜三甲基｜ 脓 ｜ 光 ｜ 他 ｜染 ｜萄｜ ｜ 氨 ｜双 ｜还 ｜明｜试
菌 种 ｜溴化铵｜ 菌 ｜ 色 ｜ 色 ｜色 ｜糖｜酶｜ 酶 ｜水酶｜原 气｜胶｜验
｜琼脂 ｜ 素 ｜ 素 ｜ 素 ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
绿脓杆菌 ｜ ＋ ｜＋／－｜＋／ ｜＋／－｜端极｜＋｜＋｜ ＋ ｜＋ ｜ ＋ ｜＋｜＋
(P. aeruginosa) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜单毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
萤光假单胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜端极｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜－／＋｜＋｜－
(P. fluorescens) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜多毛｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
恶臭假单胞菌 ｜－／＋｜ － ｜＋／－｜ － ｜” ｜＋｜＋｜－／＋｜＋ ｜ － ｜－｜－
(P. putida) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
洋葱假单胞菌 ｜＋／－｜ － ｜ － ｜－／＋｜” ｜＋｜＋｜ ＋ ｜－ ｜ － ｜＋｜＋／－
(P. cepacia) ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜ ｜
－－－－－－－－－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－－｜－－｜－｜－｜－－－｜－－｜－－－｜－｜－－－
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关于印发梅州市乡镇船舶安全管理规定的通知
广东省梅州市人民政府
梅市府〔2005〕12号
关于印发梅州市乡镇船舶安全管理规定的通知
各县（市、区）人民政府，市府直属有关单位：
现将《梅州市乡镇船舶安全管理规定》印发给你们，请认真按照执行。
梅 州 市 人 民 政 府
二○○五年五月十二日
梅州市乡镇船舶安全管理规定
第一条 为加强乡镇船舶安全管理，维护水上交通运输秩序，保障人民生命财产安全，根据《中华人民共和国内河交通安全管理条例》和《广东省乡（镇）运输船舶安全管理规定》等有关规定，结合我市实际，制定本规定。
第二条 本规定适用于本市行政区域内水域从事航行、停泊和作业的乡镇船舶及其所有人和经营人。
第三条 本规定适用于下列乡镇船舶（不含渔业船舶）：
（一）乡镇和农村企业、事业单位的运输船舶；
（二）乡镇个体户、联户、承包户从事客货运输的船舶；
（三）乡镇水库、园林、风景区水域中从事游览的船舶及其工作船；
（四）渡口的渡船；
（五）乡镇从事采沙等作业的经营性船舶；
（六）乡镇居民自身或家庭生活和农副业生产必需的、主要在本镇（街道）或相邻镇（街道）水域航行的、不从事社会性运输的自用船舶；
（七）按规定不得在主航道航行的其他非经营性船舶。
第四条 乡镇船舶安全管理遵循安全第一、预防为主，方便群众、依法管理的原则，在市政府的领导下，各县（市、区）、镇人民政府（街道办事处）、村（居）民委员会，应当加强本行政区域内乡镇船舶的安全管理，交通管理部门和有关管理部门负责行业管理，海事管理部门负责对所辖内河通航水域实施水上交通安全监督管理。
第五条 县（市、区）人民政府应加强本行政区域内水域交通安全管理工作，建立、健全乡镇船舶安全管理责任制。
（一）与镇人民政府（街道办事处）签订乡镇船舶安全管理责任书，并将乡镇船舶安全管理工作纳入干部政绩考核内容；
（二）组织交通、海事、安监、质监、工商和公安等有关部门开展安全检查和专项整治，查处违法生产的乡镇船舶修造厂（点）和违法航行、停泊或者作业的乡镇船舶；
（三）编制水上交通应急预案，领导、协调水上交通事故的救助、调查和处理，做好事故上报和善后工作。
第六条 政府有关职能部门对乡镇船舶的管理职责：
（一）交通管理部门按照有关法律、法规、规章对乡镇船舶交通安全实施行业管理。负责运输船舶的营运资质审批和管理；制定渡船更新改造计划，多渠道筹集资金加快渡船的更新改造；规范船舶运输和船厂生产行为；
（二）海事管理部门按照有关法律、法规、规章依法履行职责，加强安全监督。建立、健全乡镇船舶交通安全监督检查制度，定期或不定期开展巡航监督检查，查处水上交通安全的违法行为；按有关规范把好船员考试发证关；协助当地政府加强乡镇船舶管理员的业务培训，指导乡镇船舶管理员加强对乡镇船舶的安全管理；
（三）安全监督管理部门按照有关法律、法规、规章负责乡镇船舶安全管理的综合协调工作，督促落实安全管理责任制；
（四）旅游部门负责管辖范围内水上旅游场所和山塘、水库等水域的旅游船、工作船的安全管理，制止船舶非法运输或者作业；
（五）水利（水务）部门负责管辖范围内山塘、水库等水域自用工作船的安全管理；
（六）其他有关部门依据有关法律、法规、规章加强对乡镇船舶或者乡镇修造船厂（点）的管理。
第七条 镇人民政府（街道办事处）对乡镇船舶的管理职责：
（一）建立、健全本行政区域内的乡镇船舶安全管理责任制，与村（居）民委员会签订乡镇船舶安全管理责任书，负责乡镇船舶日常安全管理；
（二）落实本行政区域内乡镇船舶管理人员，建立乡镇船舶管理台帐，组织人员到水库、渡口、码头等现场检查和维护安全秩序，制止、纠正乡镇船舶违法航行、停泊或者作业；
（三）配合县人民政府及有关部门查处违法生产的乡镇船舶修造厂（点）；
（四）协助水上交通事故的救助、调查和处理，做好事故上报和善后工作；
（五）督促船舶所有人、经营人和船员遵守有关内容交通安全的法律、法规和规章。
第八条 村（居）民委员会对乡镇船舶的管理职责：
（一）建立乡镇船舶安全管理责任制，与自用船舶等非经营性船舶的所有人签订《广东省非营运性乡镇船舶安全责任保证书》，并报镇人民政府（街道办事处）备案；
（二）落实本行政区域内乡镇船舶管理人员，建立乡镇船舶管理台帐，负责本村（居）民委员会乡镇船舶的日常安全管理，教育和督促乡镇船舶所有人、经营人和船员按规定办理有关证照，制止、纠正乡镇船舶违法航行、停泊或者作业。对制止无效的，应及时上报当地人民政府或者有关部门；
（三）严格遵守《广东省乡镇渡口管理办法》，保证本村不违章私设渡口；
（四）在洪水期和节假日、圩日派人到渡口、码头等现场维护安全秩序，防止乡镇船舶超载等违法行为；
（五）配合上级政府及有关部门查处违法生产的乡镇船舶修造厂（点）和 违法航行或者作业的乡镇船舶；配合做好水上交通事故的救助和有关善后工作。
第九条 乡镇船舶所有人或者经营人对其所有或者经营的船舶交通安全负直接责任。
（一）必须按本规定以及有关法律、法规、规章的规定，到所在地镇人民政府（街道办事处）或者有关部门办理有关证照等手续，不得伪造、变造、买卖、租借、冒用船舶有关证照；
（二）不得将不具备资质条件（包括无牌无证、证书不齐、证书失效和技术状况不良等）的船舶投入客货运输或者采沙等作业；
（三）不得超载运输；
（四）渡船渡运时，应注意避让过往船舶，不得抢航或者强行横越；
（五）遇洪水或者大风、大雾等恶劣天气不得冒险航行和渡运，不符合夜航技术条件的不得夜航；
（六）自用船舶载人不得载客渡运，航行时船员上人数不超过3人（含驾船者本人）；
（七）自用船舶不得超越核定航区或者到主航道航行；采沙船舶不得超越核定区域或者到主航道作业；
（八）其他违反法律、法规和规章的行为。
第十条 乡镇船舶具备下列条件，方可航行：
（一）经海事管理部门认可的船舶检验机构依法检验并持有合格的船舶检验证书；
（二）经海事管理部门依法登记并持有船舶登记证书；
（三）配备符合国务院交通主管部门规定的船员；
（四）配备必要的航行资料。
第十一条 乡镇运输船舶所有人或经营人应按规定取得《水路运输许可证》和《船舶营业运输证》，并向工商行政管理部门申领《营业执照》后，方可从事营运。从事营运性运输的乡镇船舶应按国家有关规定办理保险。
乡镇非营运性船舶不得从事经营性运输活动。
第十二条 从事采沙等作业的经营性船舶除必须具备第十条规定的条件外，还须向海事管理部门申领《水上水下施工作业许可证》；依照法律、法规的规定需经其他有关部门审批的，还应当依法办理有关审批手续，方可从事采沙等作业活动。
第十三条 自用船舶等非经营性船舶的所有人必须与当地村（居）民委员会签订《广东省非营运性乡镇船舶安全责任保证书》，并报当地镇人民政府（街道办事处）备案。
自用船舶继承、赠与、转让的，被继承人、受赠人、受让人应按前款规定重新办理有关手续。
第十四条 乡镇运输船舶不得擅自载运易燃、易爆、有毒、有害等危险品。任何单位和个人不得擅自租用或委托乡镇运输船舶运载危险物品。
第十五条 渡口管理应按照《中华人民共和国内河交通安全管理条例》和《广东省乡镇渡口管理办法》的规定执行，实行谁经营、谁管理、谁负责的原则。经批准设置的渡口，必须实行定渡口、定渡船、定渡工、定载额、定制度。
第十六条 乡镇渡口的设置和撤销必须由渡口经营人提出申请，在征求当地海事管理部门意见后，报渡口所在地县（市、区）人民政府审批。
第十七条 乡镇渡口必须符合国家规定的条件，并设置明显的标志和“渡口守则”牌。
第十八条 乡镇运输船舶违反本规定或者有关法律、法规、规章的，按《中华人民共和国内河交通安全管理条例》和《广东省乡（镇）运输船舶安全管理规定》的规定给予处罚。
第十九条 乡镇自用船舶等非经营性船舶违反本规定或者有关法律、法规、规章，经教育仍不改正的，由当地人民政府组织有关部门采取拆除动力装置、暂扣船舶等强制措施，情节严重的，予以没收。
第二十条 乡镇船舶的所有人或者经营人构成违反治安管理行为的，由公安机关依法处理；触犯刑律的，移送司法机关追究刑事责任。
第二十一条 乡镇渡口违反第十五条规定的，按《中华人民共和国内河交通安全管理条例》和《广东省乡镇渡口管理办法》的规定给予处罚。
第二十二条 各级人民政府和有关部门工作人员、村（居）民委员会干部、乡镇船舶安全管理员在乡镇船舶安全管理中表现突出，成绩显著的，应当予以奖励；对玩忽职守、推诿扯皮导致发生重特大水上交通事故的，按照国家有关规定追究有关人员责任；触犯刑律的，移送司法机关追究刑事责任。
第二十三条 渔船的安全管理由渔政部门依法实施管理。
第二十四条 本规定涉及的《广东省非营运性乡镇船舶安全责任保证书》（见附件）由市人民政府指定有关部门统一印制。
第二十五条 本规定自2005年7月1日起施行。
广东省非营运性乡镇船舶安全责任保证书
镇 村：
本船是非营运性船舶，我是本船的所有人。本船航行区域为：
自： 至
根据国家有关法律法规的规定，特保证如下：
一、我接受当地乡镇政府、村对本船的日常安全管理。
二、我保证本船不载客渡运；保证本船航行时船上人数不超过叁人；保证本船航线不超出上述航行区域；
三、违反此保证，我接受政府主管及监督部门采取包括扣留船舶等措施的行政处罚。
保证人： 村船舶安全管理责任人：
年 月 日 村委会盖章
